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轉基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b定量檢測法

發布時間: 2022-12-08  點擊次數: 1023次

轉基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b僅用于食品和飼料中轉基因DAS-44406-6大豆的鑒定和定量方法的校準或質量控制。干的CRM粉具有吸濕性。

轉基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b是五種DAS-44406-6大豆粉末認證參考物質(CRMs)之一,含有不同質量分數的轉基因大豆。ERM-BF436b是由陶氏農業科學公司(DAS,Oxon,UK)提供的轉基因DAS-44406-6大豆的全種子生產而成。


熒光PCR和數字PCR法檢測基因DAS-44406-6品系大豆:

目的:建立實時熒光聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)檢測轉基因DAS-44406-6品系大豆的定性檢測方法和使用數字PCR檢測轉基因DAS-44406-6品系大豆的定量檢測方法。

方法:針對轉基因DAS- 44406-6大豆品系,進行5’-RACE,測定該品系轉基因大豆外源片段與大豆染色體重組的邊界序列,并根據該邊界 序列設計引物和探針。使用23 種非DAS-44406-6品系轉基因植物作為陰性對照測試實時熒光PCR引物和探針的特異 性,以DAS-44406-6品系樣品制備6 個含量梯度的樣品進行檢測低限實驗。使用數字PCR技術進行定量檢測,并確 定定量檢測的低限。

結果:建立的轉基因DAS-44406-6大豆品系的實時熒光PCR特異性檢測方法品系鑒定特異性較 強,實時熒光PCR檢測方法的檢測低限在模板DNA濃度為100 ng/反應時,為0.01%的轉基因大豆含量,約為16.6 個 拷貝的DAS-44406-6基因組DNA;數字PCR檢測方法的檢測低限在模板DNA濃度為0.5 ng/反應、轉基因大豆含量為 1%時,相對標準偏差為0.7%。因此,建立的轉基因DAS-44406-6大豆品系實時熒光PCR和數字PCR特異性檢測方法 符合轉基因檢測的要求。

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